MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402152

概要

MC1Rはメラノコルチン1受容体（MC1-R）をコードしており、これは主にメラノサイトに発現するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。MC1-RはGαsと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化し、cAMPを増加させます。活性化したMC1-Rシグナルはユーメラニン合成を促進し、MITFなどの下流制御因子を介して色素形成プログラムを支える一方、酸化ストレスや紫外線（UV）誘発性損傷経路を含む細胞ストレス応答とも交差します。MC1Rの変異や発現制御異常は色素表現型の変化と関連し、メラノーマ感受性やその他のUV関連皮膚病態との関連が広く研究されています。色素形成にとどまらず、MC1-Rシグナルは炎症やメラノコルチン・ネットワーク生物学の観点からも研究されており、受容体シグナル伝達やGPCR経路研究の機序解析の足がかりとなります。

MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMC1R遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MC1R内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MC1Rのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MC1-Rタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MC1-Rシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MC1R欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MC1-Rの機能に不可欠なMC1Rエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MC1Rゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMC1-R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MC1R遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MC1-R HDRプラスミド（h）および MC1-R HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMC1Rホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMC1R標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。