MBOAT5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403597-ACT

LPCAT3（別名MBOAT5）は、Lands’ cycle（ランズサイクル）を介してリン脂質をリモデリングする膜結合型O-アシルトランスフェラーゼをコードしており、リゾホスファチジルコリンへのアシル鎖転移を触媒することで、膜組成およびシグナル脂質の利用可能性の維持に寄与します。多価不飽和リン脂質プールを形成することで、MBOAT5は小胞輸送、受容体シグナル伝達、ならびに脂質過酸化感受性に関連する酸化ストレス応答など、膜依存的プロセスに影響を及ぼします。リン脂質リモデリングの異常は代謝性および炎症性の表現型と関連づけられており、そのためMBOAT5は脂質恒常性やストレス適応プログラムを研究する上で重要な結節点となります。この経路の機能解析は、肝機能障害や心代謝異常、免疫活性化、脂質駆動性の細胞状態遷移のモデルに対して一般的に適用されています。

MBOAT5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LPCAT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MBOAT5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LPCAT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLPCAT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MBOAT5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLPCAT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMBOAT5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLPCAT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMBOAT5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。