MBNL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406573

概要

MBNL3（muscleblind-like splicing regulator 3）はRNA結合タンパク質であり、pre-mRNA上のYGCYモチーフを認識して、選択的スプライシング、mRNAの安定性、および局在を制御します。MBNL3は、細胞状態の遷移を形作る転写後遺伝子制御プログラムに関与しており、分化に伴うスプライシング選択や、組織特異的な転写産物アイソフォームの選択などに関わります。MBNLファミリータンパク質は、アイソフォーム依存的な制御を介して、細胞骨格の構築、シグナル出力、代謝リモデリングと結び付いたRNAプロセシングネットワークの中核ノードとして機能します。MBNLを介したスプライシングの破綻は、RNA毒性に駆動される神経筋疾患の機序や、発生およびがん関連の文脈で観察されるトランスクリプトーム全体にわたるスプライシング異常に関与すると示唆されています。

MBNL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMBNL3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MBNL3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MBNL3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MBNL3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MBNL3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MBNL3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MBNL3の機能に不可欠なMBNL3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MBNL3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MBNL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMBNL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MBNL3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MBNL3 HDRプラスミド（h）および MBNL3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMBNL3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMBNL3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。