Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421601

概要

Cma1は、マウスのマスト細胞プロテアーゼ5（chymaseファミリーに属するセリンプロテアーゼ）をコードしており、結合組織型マスト細胞の分泌顆粒に貯蔵され、FcεRI依存性の脱顆粒に伴って放出されます。マスト細胞プロテアーゼ5は、ペプチドやサイトカイン関連基質をタンパク質分解的にプロセシングすることで、細胞外マトリックスのリモデリングや、血管作動性・炎症促進性メディエーターの調節に関与し、白血球の動員および組織応答を形作ります。これらの作用を通じて、アレルギー性炎症、気道過敏性、組織線維化の基盤となる経路に寄与し、皮膚炎症や心肺リモデリングのモデルで頻繁に研究されています。マスト細胞プロテアーゼ5活性の変化は、炎症性疾患の状況下における自然免疫と獲得免疫のクロストークや、バリア組織の恒常性の変化と関連づけられています。

Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCma1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cma1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cma1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mast Cell Protease 5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mast Cell Protease 5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cma1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mast Cell Protease 5の機能に不可欠なCma1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cma1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cma1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mast Cell Protease 5 HDRプラスミド（m）および Mast Cell Protease 5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCma1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCma1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。