Plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH8 (h): sc-405928

Présentation

MARCH8 (membrane associated ring-CH-type finger 8) code une ligase E3 de l’ubiquitine localisée dans des compartiments endosomaux et à la membrane plasmique, et régule le renouvellement et le trafic, dépendants de l’ubiquitination, de multiples protéines membranaires. En contrôlant l’endocytose, l’acheminement vers les lysosomes et la disponibilité en surface des récepteurs et transporteurs, MARCH8 influence la présentation d’antigènes, la signalisation immunitaire et les voies de contrôle qualité des protéines membranaires. Son activité a été associée à la modulation de l’incorporation des glycoprotéines d’enveloppe virales et à la restriction de l’infectiosité des particules virales, mettant en évidence des rôles à l’interface entre la défense de l’hôte et la biologie des membranes. Des programmes de trafic médiés par l’ubiquitine et impliquant MARCH8, lorsqu’ils sont dérégulés, sont pertinents pour l’étude des dysfonctionnements immunitaires et des interactions pathogène–hôte dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MARCH8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MARCH8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MARCH8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MARCH8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MARCH8 pour l'étude de la signalisation de MARCH8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MARCH8 essentiels à la fonction de MARCH8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MARCH8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MARCH8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MARCH8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MARCH8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MARCH8 plasmide HDR (h) et le MARCH8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MARCH8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MARCH8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.