MARCH8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405928

概要

MARCH8（membrane associated ring-CH-type finger 8）は、エンドソームおよび形質膜コンパートメントに局在するE3ユビキチンリガーゼをコードし、複数の膜タンパク質のユビキチン化依存的な分解回転（turnover）や輸送（trafficking）を制御します。受容体やトランスポーターのエンドサイトーシス、リソソームへのルーティング、細胞表面での利用可能性を調節することで、MARCH8は抗原提示、免疫シグナル伝達、膜タンパク質の品質管理経路に影響を与えます。その活性は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の取り込み（組み込み）の調節や、ウイルス粒子の感染性の制限とも関連づけられており、宿主防御と膜生物学の接点における役割が示されています。MARCH8が関与するユビキチン介在性の輸送プログラムの破綻（異常）は、ヒト細胞における免疫機能不全や病原体—宿主相互作用の研究において重要です。

MARCH8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMARCH8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MARCH8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MARCH8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MARCH8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MARCH8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MARCH8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MARCH8の機能に不可欠なMARCH8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MARCH8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MARCH8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMARCH8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MARCH8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MARCH8 HDRプラスミド（h）および MARCH8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMARCH8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMARCH8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。