Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MAL Double Nickaseプラスミド (h2): sc-403024-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MAL Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MALダブルニカースプラスミド（h2）およびMALダブルニカースプラスミド（h22）は、MALを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MAL 抗体 (E-1): sc-390687
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MAL Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのMAL遺伝子はミエリン・リンパ球タンパク質（MAL）をコードしており、強い疎水性をもつ四回膜貫通型の膜成分として、糖脂質およびコレステロールに富む膜ミクロドメインに濃縮し、極性化上皮におけるアピカルソーティングと小胞輸送の編成を助けるとともに、ミエリン形成細胞におけるプロテオリピドの組織化にも寄与する。MALは膜ラフト依存的な輸送過程に関与し、エンドサイトーシス後のリサイクリングやシグナルの区画化に影響を与えることで、上皮極性の維持や特殊な膜ドメイン形成との関連が示されている。MALの発現変化やエピジェネティックなサイレンシングは複数のがんで報告されているほか、脱髄や免疫細胞機能に関わる状況でも観察されており、系譜分化、膜輸送異常、腫瘍生物学を研究するための有用なマーカーとなる。さらに、MALの遺伝子編集は、ラフト関連輸送経路の機構解析、細胞極性制御、およびヒトモデル系における増殖・遊走・ミエリン関連膜ダイナミクスへの文脈依存的影響の検討を可能にする。
MAL ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における MAL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MALの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MALが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。