MAGOH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402667-ACT

MAGOH (homólogo de mago, subunidade do complexo de junção de éxons) é uma proteína conservada de ligação a RNA que atua como componente central do complexo de junção de éxons, coordenando a regulação gênica pós-transcricional. Ela participa do splicing de mRNA, da exportação, da localização e da degradação de mRNA mediada por códons de parada prematuros (nonsense-mediated mRNA decay), influenciando assim o controle de qualidade do transcriptoma e a integridade do proteoma. Por meio desses processos, MAGOH contribui para a progressão do ciclo celular e para programas de neurodesenvolvimento ao moldar a expressão de genes envolvidos em proliferação e diferenciação. Alterações de dosagem ou desregulação de componentes do complexo de junção de éxons, incluindo MAGOH, têm sido associadas a mecanismos patogênicos em distúrbios do desenvolvimento e a mudanças na expressão gênica relacionadas ao câncer, tornando-a um nó útil para estudar o metabolismo de RNA em contextos relevantes para doenças.

MAGOH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAGOH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAGOH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAGOH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAGOH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAGOH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAGOH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAGOH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAGOH em células tumorais com expressão de MAGOH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.