LXR beta/NER/NR1H2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400691-ACT

NR1H2 codifica il recettore X del fegato beta (LXRβ), un recettore nucleare attivato da ligandi che forma eterodimeri con RXR per regolare programmi trascrizionali che controllano l’efflusso del colesterolo, l’omeostasi lipidica e la segnalazione infiammatoria. LXRβ integra il rilevamento degli steroli con l’espressione genica metabolica, influenzando vie quali il trasporto inverso del colesterolo (inclusa la regolazione di ABCA1/ABCG1), la biologia delle cellule schiumose dei macrofagi e il crosstalk con le risposte infiammatorie collegate a NF-κB. Nei tessuti umani e in modelli cellulari, un’attività alterata di LXRβ è stata associata a una disregolazione del metabolismo lipidico e a stati infiammatori rilevanti per l’aterosclerosi, la disfunzione metabolica e la neuroinfiammazione, a supporto di studi meccanicistici in immunometabolismo e neurobiologia.

LXR beta/NER/NR1H2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NR1H2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LXR beta/NER/NR1H2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NR1H2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NR1H2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LXR beta/NER/NR1H2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NR1H2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LXR beta/NER/NR1H2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LXR beta/NER/NR1H2 nelle cellule tumorali con espressione di NR1H2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.