Plásmido CRISPR de Activación (h) LXR beta/NER/NR1H2: sc-400691-ACT

NR1H2 codifica el receptor X hepático beta (LXRβ), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para regular programas de transcripción que controlan el eflujo de colesterol, la homeostasis lipídica y la señalización inflamatoria. LXRβ integra la detección de esteroles con la expresión génica metabólica, influyendo en vías como el transporte reverso de colesterol (incluida la regulación de ABCA1/ABCG1), la biología de las células espumosas de macrófagos y la interacción con respuestas inflamatorias vinculadas a NF-κB. En tejidos humanos y modelos celulares, la actividad alterada de LXRβ se ha asociado con un metabolismo lipídico desregulado y con estados inflamatorios relevantes para la aterosclerosis, la disfunción metabólica y la neuroinflamación, lo que respalda estudios mecanísticos en inmunometabolismo y neurobiología.

LXR beta/NER/NR1H2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR1H2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LXR beta/NER/NR1H2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR1H2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR1H2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LXR beta/NER/NR1H2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR1H2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LXR beta/NER/NR1H2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LXR beta/NER/NR1H2 en células tumorales con expresión de NR1H2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.