Particules Lentivirales d'Activation (m) LSD1: sc-430289-LAC

Le gène murin Kdm1a code la lysine-déméthylase spécifique 1A (LSD1), un régulateur de la chromatine dépendant du FAD qui enlève les marques mono- et diméthylées des histones H3K4 et H3K9 afin de moduler des programmes transcriptionnels. LSD1 agit au sein de complexes répressifs et activateurs tels que CoREST et NuRD, en s’intégrant au contrôle de l’ARN polymérase II, à la dynamique des enhancers et à des réseaux de facteurs de transcription spécifiques de lignée pour réguler la différenciation, la progression du cycle cellulaire et l’état métabolique. Par ces voies épigénétiques, Kdm1a influence le développement hématopoïétique et neural et contribue à des circuits transcriptionnels aberrants pertinents pour la biologie des cancers et des phénotypes neurodéveloppementaux. Son rôle central dans le remodelage de la chromatine fait de Kdm1a un nœud clé pour l’étude du contrôle épigénétique de l’expression génique dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales LSD1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Kdm1a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LSD1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Kdm1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LSD1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Kdm1a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.