LRIG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403210-ACT

LRIG1 (repetições ricas em leucina e domínios semelhantes a imunoglobulina 1) codifica um regulador transmembranar da sinalização de receptores tirosina-quinase que modula a abundância e a atividade de receptores como membros da família EGFR/ERBB e MET. Por meio de efeitos sobre o turnover dos receptores e sobre as vias de sinalização a jusante MAPK/ERK e PI3K/AKT, o LRIG1 contribui para o controle da proliferação, diferenciação e homeostase tecidual. Em muitos contextos experimentais, o LRIG1 está ligado à biologia de células-tronco/progenitoras epiteliais e neurais, nas quais pode influenciar a sinalização do nicho e a contenção do ciclo celular. A expressão alterada de LRIG1 tem sido associada à desregulação da sinalização por fatores de crescimento observada em múltiplos modelos relevantes para doenças, sustentando seu uso como um nó para investigação de vias.

LRIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRIG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRIG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRIG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRIG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRIG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRIG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRIG1 em células tumorais com expressão de LRIG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.