LKB1 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437297-ACT

LKB1（STK11とも呼ばれる）は、セリン／スレオニンキナーゼをコードしており、AMPKファミリーキナーゼを活性化して代謝ストレス応答を統合的に制御することで、細胞のエネルギー恒常性におけるマスター制御因子として機能する。ラット細胞では、LKB1は栄養状態や細胞極性に関するシグナルを統合し、AMPK–mTORシグナル伝達などの経路を介して、ミトコンドリア代謝、オートファジー、上皮細胞の極性維持に影響を及ぼす。その活性は、低エネルギー条件下における細胞周期の進行や生存にも関与し、LKB1の状態は、増殖制御の変化や代謝適応を伴う表現型と結び付く。LKB1関連シグナルネットワークの破綻は、エネルギー感知や極性プログラムが乱れる組織恒常性、炎症、がん化（腫瘍性形質転換）などの文脈で広く研究されている。

LKB1 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LKB1 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LKB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLKB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLKB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。