Limd1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424343

概要

LIMドメイン含有タンパク質1（Limd1）は、フォーカルアドヒージョンおよび細胞間接着部位に局在する足場（スキャフォールド）タンパク質であり、タンパク質間相互作用を統合して細胞骨格の構築やメカノトランスダクションを制御します。Limd1は細胞接着、遊走、増殖制御を司る経路に関与し、LATS活性やYAP/TAZの局在に影響を与える相互作用を介してHippo/YAPシグナル伝達の調節にも関連付けられています。マウス系では、接着依存的シグナルが重要となる組織恒常性や発生プログラムの研究において、Limd1が活用されています。LIMD1関連ネットワークの破綻は、腫瘍抑制因子としての生物学や転移関連表現型（浸潤能の変化や上皮間葉転換（EMT）様プロセスなど）とも関係します。

Limd1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLimd1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Limd1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Limd1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Limd1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Limd1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Limd1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Limd1の機能に不可欠なLimd1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Limd1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Limd1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLimd1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Limd1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Limd1 HDRプラスミド（m）および Limd1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLimd1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLimd1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。