Plasmide CRISPR/Cas9 KO Limd1 (m): sc-424343

Présentation

Le domaine LIM containing 1 (Limd1) est une protéine d’échafaudage qui se localise aux adhérences focales et aux jonctions cellule–cellule, en coordonnant des interactions protéine–protéine qui façonnent l’organisation du cytosquelette et la mécanotransduction. Limd1 participe à des voies contrôlant l’adhésion cellulaire, la migration et la régulation de la croissance, et a été associée à la régulation de la signalisation Hippo/YAP via des interactions qui influencent l’activité de LATS et la localisation de YAP/TAZ. Dans les systèmes murins, Limd1 soutient l’étude de l’homéostasie tissulaire et des programmes développementaux où la signalisation dépendante de l’adhésion est essentielle. La dérégulation des réseaux associés à LIMD1 est pertinente pour la biologie des suppresseurs de tumeur et des phénotypes liés aux métastases, notamment l’altération de l’invasion et des processus de type transition épithélio-mésenchymateuse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Limd1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Limd1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Limd1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Limd1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Limd1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Limd1 pour l'étude de la signalisation de Limd1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Limd1 essentiels à la fonction de Limd1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Limd1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Limd1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Limd1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Limd1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Limd1 plasmide HDR (m) et le Limd1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Limd1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Limd1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.