LIF Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421432-ACT

O fator inibitório de leucemia murino (LIF) é uma citocina pleiotrópica da família da IL-6 que sinaliza por meio do receptor de LIF e da gp130 para ativar as vias JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT. O LIF regula a autorrenovação e a pluripotência de células-tronco embrionárias, influencia a diferenciação de astrócitos e programas de neuroinflamação, e modula o comportamento de células hematopoéticas e do sistema imune. Em tecidos periféricos, o LIF contribui para a implantação e a receptividade uterina, a remodelação óssea e respostas ao estresse tecidual ao coordenar redes transcricionais dirigidas por citocinas. A desregulação da sinalização de LIF tem sido associada a alterações em estados de células-tronco, remodelamento fibrótico e interações tumor–estroma em modelos de inflamação e biologia do câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de vias e fenótipos.

LIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lif sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lif em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lif, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lif nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIF em células tumorais com expressão de Lif silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.