LIF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401120-ACT

ヒト白血病阻害因子（LIF）はIL-6ファミリーに属する多機能性（プレオトロピック）サイトカインで、LIFR/gp130受容体複合体を介してシグナル伝達し、JAK/STAT3、MAPK/ERK、PI3K/AKT経路を活性化します。LIFは、幹細胞の自己複製、分化、生存、炎症性クロストークなど、細胞の運命決定を調節し、発生期および成体組織において文脈依存的な作用を示します。LIFシグナルの破綻は、腫瘍–間質相互作用、免疫調節、線維化に伴うリモデリング、生殖生物学などに関与するとされており、疾患関連モデルにおける経路解析の有用な結節点（ノード）となります。分泌因子としてのLIFは、パラクリンシグナル、細胞外サイトカインネットワーク、ならびにSTAT3下流の転写プログラムの研究にも有用です。

LIF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LIFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LIF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LIF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLIF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LIFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLIF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLIF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLIF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLIF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。