Plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX5 (m): sc-421428

Présentation

Lhx5 code le facteur de transcription LIM homeobox LHX5, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, indispensable à la mise en place des structures et à la différenciation du système nerveux central en développement. Chez la souris, LHX5 contribue à l’identité régionale et à la spécification des lignées neuronales via des programmes transcriptionnels dépendants des domaines LIM, qui s’articulent avec des réseaux homeobox plus larges contrôlant la neurogenèse et le guidage axonal. Une activité altérée de LHX5 est associée à des anomalies du développement du télencéphale et de l’hippocampe, ainsi qu’aux phénotypes neurodéveloppementaux qui en résultent, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la formation des circuits neuronaux. En tant que régulateur transcriptionnel, LHX5 influence des cascades d’expression génique en aval qui façonnent les choix de destin cellulaire et les états de maturation des progéniteurs neuraux et des neurones en différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lhx5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lhx5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lhx5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LHX5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lhx5 pour l'étude de la signalisation de LHX5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lhx5 essentiels à la fonction de LHX5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lhx5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LHX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LHX5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lhx5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LHX5 plasmide HDR (m) et le LHX5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lhx5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lhx5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.