Plasmide CRISPR d'Activation (h) Legumain: sc-402437-ACT

Le gène humain **LGMN** code la légumaïne, une endopeptidase lysosomale asparaginylée qui assure le traitement protéolytique de substrats intracellulaires et extracellulaires en conditions acides. La légumaïne participe au renouvellement des protéines dans le compartiment endolysosomal, aux voies de traitement des antigènes dans les cellules immunitaires, ainsi qu’au remodelage de la matrice extracellulaire via l’activation d’autres protéases et le clivage de protéines associées à la matrice. Une expression et une activité dérégulées de **LGMN** ont été associées à l’inflammation, à la fibrose et à la biologie du microenvironnement tumoral, où des réseaux de protéases altérés peuvent influencer l’invasion, l’angiogenèse et la modulation immunitaire. Par conséquent, **LGMN** est largement étudié dans le cadre de la fonction lysosomale, de la protéostasie et de la signalisation médiée par les protéases, notamment dans des contextes liés au cancer et à la neuroinflammation.

Legumain Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGMN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Legumain Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGMN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGMN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Legumain. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGMN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Legumain au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Legumain dans les cellules tumorales présentant une expression de LGMN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.