Lck Double Nickaseプラスミド (h): sc-400434-NIC

LCKは、Srcファミリーに属するチロシンキナーゼであるLckをコードしており、ITAMモチーフをリン酸化し、ZAP70およびアダプター複合体のリクルートを協調することで、T細胞受容体下流のシグナル伝達を開始する。これらの近位（受容体直下）のイベントを介して、LckはT細胞の発生、活性化、サイトカイン産生、免疫シナプス形成を制御するMAPK/ERK、PI3K–AKT、NF-κB/NFAT経路の活性化を調節する。LCK活性や発現の破綻はリンパ球のシグナル伝達状態の変化と関連し、免疫調節異常や血液悪性腫瘍の生物学に関与することが示唆されている。受容体近傍のリン酸化ネットワークにおける結節点として、Lckはヒト免疫細胞のリン酸化プロテオミクス、キナーゼシグナル、機能ゲノミクスの分野で広く研究されている。

Lck ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LCK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LCK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LCKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LCKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。