LAT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401609-ACT

SLC7A5は、ヒトのL型アミノ酸トランスポーター1（LAT1）をコードする。LAT1は高親和性トランスポーターであり、重鎖であるSLC3A2（CD98）と複合体を形成して、ロイシンなどの大型中性アミノ酸の取り込みを仲介する。細胞内アミノ酸の利用可能性を制御することで、LAT1は栄養シグナルの感知と同化代謝を支え、輸送を増殖やプロテオスタシスに結び付けるmTORC1や統合ストレス応答経路などのシグナルネットワークに影響を与える。LAT1活性は、代謝リプログラミング、バリア輸送生物学、ならびにアミノ酸フラックスが生合成能を制約する増殖性表現型といった文脈で、しばしば研究対象となっている。SLC7A5発現の異常は、複数の疾患モデルにおいて栄養依存性の変化やトランスポーターに結び付いた脆弱性と関連付けられており、アミノ酸駆動型シグナル伝達を解析するための入口として広く用いられている。

LAT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC7A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LAT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC7A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC7A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LAT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC7A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLAT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC7A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLAT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。