Plasmide CRISPR/Cas9 KO LARP4 (h): sc-414019

Présentation

La protéine « ribonucleoprotein domain family member 4 » (LARP4) est une protéine liant l’ARN qui s’associe à la protéine de liaison à la poly(A) et régule la stabilité des ARNm ainsi que l’efficacité de leur traduction dans le cytoplasme. Par ses interactions avec les complexes mRNP et la machinerie de traduction, LARP4 influence la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, affectant la production de protéines et l’adaptation cellulaire aux signaux de croissance et de stress. Ces fonctions relient LARP4 à des voies contrôlant la prolifération et la migration cellulaires, ainsi que la dynamique du cytosquelette, via des modifications en aval du destin des transcrits et du contrôle traductionnel. La dérégulation du métabolisme de l’ARN et de la traduction constitue une caractéristique récurrente de nombreux cancers et de contextes neurodéveloppementaux, faisant de LARP4 un nœud utile pour des études mécanistiques de programmes d’expression génique pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LARP4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LARP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LARP4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LARP4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LARP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LARP4 pour l'étude de la signalisation de LARP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LARP4 essentiels à la fonction de LARP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LARP4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LARP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LARP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LARP4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LARP4 plasmide HDR (h) et le LARP4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LARP4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LARP4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.