Langerin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401949-ACT

CD207 codifica a Langerina, um recetor de lectina do tipo C enriquecido em células de Langerhans e em subpopulações relacionadas de células dendríticas, que atua no reconhecimento de patógenos e na captura de antigénios nas barreiras epiteliais. A Langerina liga-se a motivos de carboidratos de forma dependente de Ca²⁺ e medeia a endocitose para os grânulos de Birbeck, moldando programas de processamento e apresentação de antigénios que influenciam o início da resposta imunitária adaptativa. Por meio da captação mediada por lectina e do encaminhamento para compartimentos endossomais, cruza-se com a deteção imunitária inata e com a sinalização inflamatória que modulam a produção de citocinas e a polarização de células T. Alterações na expressão de CD207/Langerina ou na função das células de Langerhans são relevantes para estudos de homeostase imunitária da pele, inflamação alérgica e respostas imunitárias de barreira associadas a infeções.

Langerin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD207 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Langerin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD207 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD207, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Langerin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD207 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Langerin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Langerin em células tumorais com expressão de CD207 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.