Laminin γ-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401068-ACT

LAMC2 codifica a laminina gama-2, uma subunidade essencial da laminina-332 na membrana basal que sustenta a adesão, a polaridade e a migração de células epiteliais por meio de sinalização mediada por integrinas. Ao interagir com receptores como as integrinas α3β1 e α6β4, a laminina-332 modula a dinâmica das adesões focais, a estabilidade dos hemidesmossomos e vias a jusante, incluindo FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. A expressão de LAMC2 está intimamente ligada à remodelação da matriz extracelular e à reepitelização de feridas, influenciando a motilidade de queratinócitos e a integridade tecidual. A desregulação da laminina gama-2 tem sido associada à alteração da função de barreira epitelial e a fenótipos invasivos em múltiplos contextos de doença, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização entre MEC e célula.

Laminin γ-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin γ-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin γ-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin γ-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin γ-2 em células tumorais com expressão de LAMC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.