Plasmide Double Nickase (h) Laminin β-3: sc-402636-NIC

LAMB3 code pour la laminine β-3, une sous-unité essentielle de la laminine-332 (α3β3γ2), une glycoprotéine de la membrane basale qui organise l’architecture de la matrice extracellulaire et favorise l’adhésion, la polarité et la migration des épithéliums. Grâce à ses interactions avec des intégrines telles que α3β1 et α6β4, la laminine-332 soutient l’assemblage des hémidesmosomes et module les voies de signalisation des adhérences focales qui influencent la dynamique du cytosquelette et l’intégrité tissulaire. Les signaux matriciels dépendants de LAMB3 sont au cœur de la fonction de barrière épidermique et muqueuse, et une expression ou une organisation altérées de la laminine-332 ont été associées à des affections de fragilité cutanée ainsi qu’à un comportement invasif dans les tumeurs épithéliales. Ces caractéristiques font de LAMB3 une cible largement utilisée pour l’étude de la biologie de la membrane basale, de la signalisation cellule–matrice et du remodelage épithélial.

Laminin β-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.