Lamin B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400032-ACT

LMNB1 codifica a lamina B1, um componente principal da lâmina nuclear que sustenta a arquitetura do núcleo e ancora a heterocromatina periférica. A lamina B1 coordena a organização da cromatina, a replicação e o reparo do DNA e a dinâmica do envelope nuclear durante a mitose, integrando sinais mecânicos a programas transcricionais. Por meio de interações com domínios associados à lâmina e com complexos do poro nuclear, ajuda a regular a estabilidade do genoma e a progressão do ciclo celular. Alterações na dosagem de LMNB1 ou na integridade da lâmina nuclear têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e desmielinizantes e são frequentemente estudadas no contexto de laminopatias, defeitos nucleares associados ao envelhecimento e plasticidade de células tumorais.

Lamin B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LMNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Lamin B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LMNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LMNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Lamin B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LMNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Lamin B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Lamin B1 em células tumorais com expressão de LMNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.