L-type Ca++ CP γ3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406760
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- L-type Ca++ CP γ3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico L-type Ca++ CP γ3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:L-type Ca++ CP γ3 Anticorpo (A-07): sc-81889
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
L-type Ca++ CP γ3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406760 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CACNG3 codifica a subunidade auxiliar γ3 do canal de Ca++ do tipo L humano, uma proteína reguladora transmembranar que modula o tráfego e as propriedades biofísicas dos canais de cálcio do tipo L dependentes de voltagem. Ao ajustar o influxo de cálcio, a γ3 influencia a excitabilidade de membrana, o acoplamento estímulo–secreção e programas transcricionais dependentes de cálcio que moldam a sinalização neuronal e muscular. A regulação de canais ligada ao CACNG3 cruza-se com vias dependentes de Ca2+, como a sinalização por calmodulina/CaMK e calcineurina–NFAT, impactando a plasticidade sináptica e a expressão gênica dependente da atividade. Alterações na expressão de CACNG3 ou na composição do complexo de canais têm sido investigadas em estudos sobre fenótipos neuropsiquiátricos e transtornos relacionados à excitabilidade, nos quais a homeostase do cálcio comprometida é um tema mecanístico comum.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CACNG3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CACNG3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CACNG3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína L-type Ca++ CP γ3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CACNG3 para a investigação da sinalização de L-type Ca++ CP γ3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CACNG3 críticos para a função L-type Ca++ CP γ3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CACNG3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo L-type Ca++ CP γ3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo L-type Ca++ CP γ3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CACNG3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo L-type Ca++ CP γ3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR L-type Ca++ CP γ3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CACNG3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CACNG3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.