Plasmide Double Nickase (h) KV4.2: sc-402801-NIC

KCND2 code la sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant KV4.2, un médiateur majeur des courants potassiques de type A (K+) à inactivation rapide, qui façonnent la repolarisation du potentiel d’action, la fréquence de décharge et l’excitabilité dendritique dans les cellules excitables. La fonction de KV4.2 est régulée par l’assemblage du complexe canal et par des signaux en amont, notamment la phosphorylation et les interactions avec des protéines auxiliaires qui modulent le gating, le trafic intracellulaire et la localisation membranaire. En contrôlant l’excitabilité et l’intégration synaptique, KCND2 contribue à la signalisation neuronale dépendante de l’activité et à des dynamiques de repolarisation pertinentes pour l’électrophysiologie cardiaque. Des altérations de l’expression de KCND2/KV4.2 ou des propriétés du canal ont été associées à des troubles de la signalisation électrique, notamment des phénotypes neurodéveloppementaux et liés aux crises, ainsi qu’à une susceptibilité aux arythmies dans des études axées sur l’électrophysiologie.

KV4.2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCND2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCND2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCND2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCND2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.