KV1.5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404341-NIC

KCNA5 は、遅延整流性電流として膜の再分極を形成し、細胞の興奮性を制御するヒト電位依存性カリウムチャネルサブユニット KV1.5 をコードしている。心筋などの興奮性組織では、KV1.5 は活動電位持続時間に寄与し、カルシウム動態や電気シグナル伝達を制御するイオン恒常性ネットワークと統合的に機能する。また本チャネルは、膜電位依存的なシグナル制御や細胞周期チェックポイントの調節を介して、非興奮性細胞における増殖・遊走プログラムにも影響を及ぼす。KCNA5 の発現変化やチャネル機能の異常は、心房の電気生理学的表現型や、より広範なチャネル病（チャネルオパチー）関連機構と関連づけられており、電気的リモデリングおよびシグナル伝達の研究における標的としての有用性を支持している。

KV1.5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。