Ksr-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401768

Panoramica

KSR1 codifica la kinase suppressor of Ras 1 (Ksr-1), una proteina scaffold che organizza i componenti della cascata RAF–MEK–ERK/MAPK per modulare ampiezza, durata e localizzazione subcellulare del segnale. Coordinando l’assemblaggio del modulo MAPK a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e di RAS, Ksr-1 contribuisce alla regolazione delle decisioni di proliferazione, differenziamento e sopravvivenza. L’attività e l’espressione di KSR1 sono state associate a un’alterata trasduzione del segnale lungo la via MAPK in contesti di segnalazione oncogenica, ed è stata inoltre implicata in reti di segnalazione immunitaria e infiammatoria che si intersecano con programmi trascrizionali dipendenti da ERK. Queste caratteristiche rendono KSR1 un nodo utile per analizzare l’architettura della via, il controllo tramite feedback e la propagazione del segnale specifica del contesto nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ksr-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KSR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KSR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KSR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ksr-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KSR1 per lo studio della segnalazione di Ksr-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KSR1 critici per la funzione di Ksr-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KSR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ksr-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ksr-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KSR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ksr-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ksr-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KSR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KSR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.