Ksr-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401768

概要

KSR1は、Rasのキナーゼサプレッサー1（kinase suppressor of Ras 1; Ksr-1）をコードしており、RAF–MEK–ERK/MAPKカスケードの構成要素を編成することで、シグナルの振幅、持続時間、細胞内局在を調節する足場（スキャフォールド）タンパク質です。受容体型チロシンキナーゼおよびRASの下流でMAPKモジュールの組み立てを協調的に制御することにより、Ksr-1は増殖・分化・生存といった細胞運命決定の調節に寄与します。KSR1の活性や発現は、がん遺伝子シグナル伝達の状況においてMAPK経路の出力変化と関連づけられており、さらにERK依存的な転写プログラムと交差する免疫・炎症シグナル伝達ネットワークへの関与も示唆されています。これらの特徴により、KSR1はヒト細胞における経路配線、フィードバック制御、文脈依存的なシグナル伝播を解明するための有用な結節点となります。

Ksr-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKSR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KSR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KSR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ksr-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ksr-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KSR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ksr-1の機能に不可欠なKSR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KSR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ksr-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKsr-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KSR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ksr-1 HDRプラスミド（h）および Ksr-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKSR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKSR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。