KOR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402526

Visão geral

OPRL1 codifica o receptor de nociceptina/orfanina FQ (também chamado KOR-3), um GPCR de classe A que se acopla principalmente a Gi/Go para suprimir a atividade da adenilil ciclase, reduzir a sinalização por cAMP e modular a condutância de canais iônicos. A ativação do receptor regula a transmissão sináptica e a excitabilidade neuronal, influenciando o controle mediado por neuropeptídeos do processamento da dor, da responsividade ao estresse, dos circuitos de recompensa e das funções autonômicas. A sinalização a jusante cruza-se com as vias MAPK/ERK, com o tráfego dependente de β-arrestina e com processos de dessensibilização/internalização do receptor que moldam as respostas celulares ao longo do tempo. Alterações na sinalização de OPRL1/KOR-3 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e neurocomportamentais, tornando-o relevante para estudos mecanísticos da regulação de redes neurais e da dinâmica de sinalização de GPCR.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KOR-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene OPRL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do OPRL1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do OPRL1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KOR-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de OPRL1 para a investigação da sinalização de KOR-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) OPRL1 críticos para a função KOR-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos OPRL1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KOR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo KOR-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus OPRL1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KOR-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR KOR-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia OPRL1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo OPRL1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.