Klotho Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421290-LAC

O gene Kl de camundongo codifica a Klotho, uma proteína transmembrana do tipo I de passagem única, cujo domínio extracelular pode ser clivado e liberado para atuar como um fator circulante que modula a sinalização de fatores de crescimento e hormônios. A Klotho funciona como um co-receptor obrigatório para a sinalização endócrina de FGF (notadamente FGF23) para regular o metabolismo de fosfato e vitamina D, e também influencia respostas ao estresse oxidativo e processos de canais iônicos/transporte em múltiplos tecidos. Alterações na expressão de Kl/Klotho estão associadas à desregulação da homeostase mineral, a fenótipos renais e cardiovasculares e ao declínio funcional associado ao envelhecimento em modelos murinos, tornando-o um alvo amplamente utilizado para investigação de vias. No nível celular, a Klotho impacta programas transcricionais e de sinalização ligados à regulação metabólica, ao tônus inflamatório e à resiliência ao estresse, sustentando estudos mecanísticos de biologia associada à degeneração.

As Partículas de Ativação Lentivirais Klotho (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Kl numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Klotho (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Kl, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Klotho. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Kl e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.