Particules Lentivirales d'Activation (m) Klotho: sc-421290-LAC

Le gène murin *Kl* code la klotho, une protéine transmembranaire de type I à passage unique, dont le domaine extracellulaire peut être clivé et libéré pour agir comme facteur circulant modulant la signalisation des facteurs de croissance et des hormones. La klotho fonctionne comme co‑récepteur indispensable de la signalisation endocrine des FGF (notamment FGF23) afin de réguler le métabolisme du phosphate et de la vitamine D, et elle influence également les réponses au stress oxydatif ainsi que les processus de canaux/transport ioniques dans de nombreux tissus. Des altérations de l’expression de *Kl*/klotho sont associées à une homéostasie minérale dérégulée, à des phénotypes rénaux et cardiovasculaires et à un déclin fonctionnel lié à l’âge dans des modèles murins, ce qui en fait une cible couramment utilisée pour l’exploration des voies de signalisation. Au niveau cellulaire, la klotho affecte des programmes transcriptionnels et de signalisation liés à la régulation métabolique, au tonus inflammatoire et à la résistance au stress, soutenant des études mécanistiques de la biologie associée à la dégénérescence.

Les particules d'activation lentivirales Klotho (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Kl dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Klotho (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Kl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Klotho. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Kl ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.