KLF6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423861-ACT

O gene **Klf6** de camundongo codifica o fator Krüppel-like 6 (KLF6), um fator de transcrição com dedos de zinco que se liga a elementos promotores ricos em GC para regular programas gênicos que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a remodelação tecidual. O KLF6 integra redes de sinalização e de transcrição responsivas ao estresse, modulando, de maneira dependente do contexto, processos como a regulação da matriz extracelular, a expressão de genes inflamatórios e a adaptação metabólica. Alterações na atividade de KLF6 têm sido associadas à proliferação desregulada, à remodelação relacionada à fibrose e a estados transcricionais oncogênicos, o que o torna um nó útil para estudos mecanísticos de regulação gênica em modelos de desenvolvimento e de doença. Em sistemas murinos, a perturbação de **Klf6** é frequentemente utilizada para investigar o controle transcricional do comprometimento de linhagem e das respostas a lesão em compartimentos epiteliais, imunes e estromais.

KLF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Klf6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Klf6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Klf6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLF6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Klf6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLF6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLF6 em células tumorais com expressão de Klf6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.