Plasmide CRISPR d'Activation (m) KLF6: sc-423861-ACT

Le gène murin *Klf6* code le facteur de transcription Krüppel-like factor 6 (KLF6), une protéine à doigts de zinc qui se lie à des éléments promoteurs riches en GC afin de réguler des programmes géniques contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le remodelage tissulaire. KLF6 s’intègre à des réseaux de signalisation et de transcription sensibles au stress, modulant de manière contextuelle des processus tels que la régulation de la matrice extracellulaire, l’expression de gènes inflammatoires et l’adaptation métabolique. Une activité altérée de KLF6 a été associée à une prolifération dérégulée, à un remodelage lié à la fibrose et à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation génique dans des modèles de développement et de maladie. Dans les systèmes murins, la perturbation de *Klf6* est fréquemment utilisée pour explorer le contrôle transcriptionnel de l’engagement de lignée et des réponses aux lésions dans les compartiments épithéliaux, immunitaires et stromaux.

KLF6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Klf6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLF6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Klf6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Klf6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLF6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Klf6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLF6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLF6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Klf6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.