KLF12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403992-ACT

KLF12（Krüppel-like factor 12）は、GCリッチなプロモーター要素に結合して遺伝子発現プログラムを制御するC2H2型ジンクフィンガー転写因子であり、増殖、分化、上皮—間葉可塑性を司ります。核内レギュレーターとしてのKLF12は、細胞周期の進行や系譜（ライン）特異化を形作る転写ネットワークと連携し、下流では細胞骨格の構築や細胞運動性にも影響を及ぼします。KLF12の活性や発現の変化は、浸潤や転移性挙動を含むがん関連プロセスにおける転写制御の破綻と関連づけられており、発生や内分泌に関わる遺伝子制御の文脈でも検討されています。KLF12量を操作することは、転写因子駆動の制御回路や、文脈依存的なエンハンサー—プロモーター制御を解析するための扱いやすいアプローチとなります。

KLF12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLF12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KLF12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLF12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLF12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KLF12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLF12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKLF12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLF12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKLF12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。