KIR4.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402244

概要

ヒトのKCNJ10は内向き整流性カリウムチャネルKIR4.1をコードしており、静止膜電位の設定に関与する膜タンパク質です。また、グリア細胞や上皮の環境において、カリウムのバッファリングおよび空間的なK+再分配を調節します。KIR4.1は、輸送過程との機能的カップリングを通じてイオンと水の恒常性を支え、細胞外K+濃度と浸透圧バランスの維持にも寄与することで、神経の興奮性や組織の微小環境の安定性に影響を与えます。KCNJ10/KIR4.1活性の異常は、グリア生理の変化、イオン恒常性の破綻、神経学的表現型と関連づけられており、イオンチャネル依存的なシグナル伝達や恒常性維持経路を研究する上で重要な標的となっています。

KIR4.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNJ10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNJ10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNJ10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIR4.1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIR4.1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNJ10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIR4.1の機能に不可欠なKCNJ10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNJ10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIR4.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIR4.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNJ10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIR4.1 HDRプラスミド（h）および KIR4.1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNJ10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNJ10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。