KIR4.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402244

Panoramica

Il gene umano **KCNJ10** codifica per il canale del potassio a rettificazione entrante **KIR4.1**, una proteina di membrana che contribuisce a stabilire il potenziale di membrana a riposo e regola il tamponamento del potassio e la ridistribuzione spaziale di K+ in contesti gliali ed epiteliali. KIR4.1 sostiene l’omeostasi di ioni e acqua grazie all’accoppiamento funzionale con processi di trasporto e contribuisce al mantenimento del K+ extracellulare e dell’equilibrio osmotico, influenzando l’eccitabilità neuronale e la stabilità del microambiente tissutale. Un’attività deregolata di KCNJ10/KIR4.1 è stata associata ad alterazioni della fisiologia gliale, a una compromissione dell’omeostasi ionica e a fenotipi neurologici, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della segnalazione dipendente dai canali ionici e delle vie omeostatiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNJ10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNJ10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNJ10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR4.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNJ10 per lo studio della segnalazione di KIR4.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNJ10 critici per la funzione di KIR4.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNJ10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNJ10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR4.1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIR4.1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNJ10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNJ10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.