KIR3.1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404965-NIC

ヒトKCNJ3は、Gタンパク質制御型内向き整流性カリウムチャネルのサブユニットKIR3.1（GIRK1）をコードしており、他のGIRKサブユニットと集合して、GPCRシグナル伝達を膜の過分極へと結び付けるヘテロ四量体チャネルを形成します。KIR3.1はK+コンダクタンスを調節することで、細胞の興奮性、発火パターン、カルシウム依存性シグナル伝達を形作り、神経伝達物質や神経調節物質からの入力を下流の電気生理学的応答へと連結します。KCNJ3/KIR3.1の活性は、GPCR–Gβγ経路や、神経回路機能および心臓電気生理に影響するイオン恒常性プロセスと統合的に作用します。GIRKチャネルの発現や機能の変化は、興奮性の制御異常に関連する表現型と結び付けられており、神経精神疾患や不整脈関連機序などの文脈で研究されています。

KIR3.1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNJ3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNJ3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNJ3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNJ3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。