KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421275

概要

Kif3a はキネシンファミリー分子 KIF3A をコードしており、KIF3A は、微小管に沿った順行性の鞭毛内輸送（intraflagellar transport: IFT）を駆動する三量体キネシン-2 複合体の中核モーターサブユニットである。KIF3A は一次繊毛の形成および維持に必須であり、Hedgehog 経路活性を含む繊毛依存的なシグナル伝達や、細胞運命決定に影響するより広範な繊毛内トラフィッキング過程を可能にする。マウス系では、Kif3a の機能は、健全な繊毛に依存する組織形態形成や恒常性維持のシグナルプログラムと密接に結び付いており、その攪乱は繊毛病（ciliopathy）に関連する表現型と関連付けられている。そのため、KIF3A は、微小管ベースの輸送が発生シグナルとどのように接続し、繊毛を介した増殖・分化制御にどう関与するかを解析するために頻繁に用いられている。

KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKif3a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Kif3a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Kif3aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIF3Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIF3Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Kif3a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIF3Aの機能に不可欠なKif3aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Kif3aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKIF3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Kif3a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIF3A HDRプラスミド（m）および KIF3A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKif3aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKif3a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。