Keratin 32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410857

Visão geral

KRT32 codifica a queratina 32, uma queratina capilar do tipo I que polimeriza com queratinas do tipo II para formar filamentos intermediários essenciais para a integridade estrutural e a resistência mecânica das fibras do cabelo. Como parte do citoesqueleto de queratinas, KRT32 contribui para a organização do citoesqueleto, para programas de diferenciação epitelial nas linhagens do folículo piloso e para a montagem de estruturas queratinizadas. A expressão alterada ou a perturbação das redes de queratinas do cabelo está associada a fenótipos de fragilidade da haste capilar e oferece um readout tratável para estudar a dinâmica de montagem dos filamentos de queratina. Assim, KRT32 é relevante para investigar respostas ao stress do citoesqueleto, o turnover dos filamentos de queratina e as relações genótipo–fenótipo na biologia do cabelo e nos processos de queratinização.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Keratin 32 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KRT32 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KRT32, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KRT32 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Keratin 32.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KRT32 para a investigação da sinalização de Keratin 32, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KRT32 críticos para a função Keratin 32
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KRT32 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Keratin 32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Keratin 32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KRT32. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Keratin 32 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Keratin 32 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KRT32 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KRT32 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.