Keratin 24 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-414948

概要

KRT24はケラチン24をコードしており、ケラチン24は上皮細胞の細胞骨格ネットワークを構成するI型中間径フィラメントタンパク質です。組織特異的な構造的完全性と機械的な強靭性の維持に寄与します。ケラチンフィラメントの組み立てや再編成の過程の一部として、KRT24は細胞骨格および接着に関連するより広範なプロセスと連動し、細胞形態、極性、バリア機能に影響を与えます。ケラチンの発現パターンの変化は、上皮のストレス応答や分化状態の変化としばしば関連するため、KRT24は有用なマーカーであると同時に、疾患に関連する状況における上皮リモデリングを研究するための機序的な手がかりにもなります。中間径フィラメントの構造が破綻すると、シグナル伝達のクロストークや細胞恒常性に影響し得ることから、上皮機能障害モデルにおいてKRT24を検討する意義があります。

Keratin 24 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKRT24遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KRT24内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KRT24のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Keratin 24タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Keratin 24シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KRT24欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Keratin 24の機能に不可欠なKRT24エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KRT24ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Keratin 24 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKeratin 24 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KRT24遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Keratin 24 HDRプラスミド（h）および Keratin 24 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKRT24ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKRT24標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。