Keap1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424513-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Keap1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Keap1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase Keap1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Keap1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Keap1 Anticorpo (F-10): sc-514914
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Keap1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-424513-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Keap1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-424513-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Keap1 (proteína 1 associada a ECH do tipo Kelch) é um adaptador citosólico de um complexo de ligase E3 de ubiquitina baseado em CUL3 que se liga a NFE2L2/NRF2 e promove sua ubiquitinação e degradação proteassomal em condições basais. O estresse oxidativo ou eletrofílico modifica resíduos de cisteína-chave em KEAP1, enfraquecendo a repressão de NRF2 e permitindo a transcrição de genes antioxidantes, de desintoxicação e metabólicos por meio do programa ARE. Esse eixo KEAP1–NRF2 coordena a homeostase redox, o metabolismo da glutationa e vias de resposta a xenobióticos em células de camundongo, influenciando inflamação, função mitocondrial e proteostase. A atividade desregulada de Keap1 é amplamente utilizada como um recurso mecanístico em modelos de biologia do estresse oxidativo e em condições caracterizadas por sinalização redox alterada.
Keap1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Keap1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Keap1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Keap1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Keap1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.