KCC4 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422974-ACT
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- KCC4 CRISPR Activationプラスミド (m)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- KCC4 CRISPR Activationプラスミド (m)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- KCC4 CRISPR活性化プラスミド（m）およびKCC4 CRISPR活性化プラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc12a7転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
KCC4 CRISPR Activationプラスミド (m) | sc-422974-ACT | 20 µg | $397.00 |
Slc12a7 は、マウスの KCC4（SLC12A7）K⁺–Cl⁻ 共輸送体をコードしており、細胞内 Cl⁻ 濃度、細胞容積、ならびにイオン恒常性の設定に寄与する、電気的に中性な塩化物排出の主要な調節因子です。Cl⁻ 勾配を形成することで、KCC4 は膜の興奮性や抑制性シグナル伝達に影響し、さらに、細胞の移動・浸潤に関連する浸透圧ストレス応答や細胞骨格リモデリングのプログラムとも交差します。KCC4 の活性は上皮のイオン輸送や pH／容積調節とも連動しており、これらの過程は組織バリア機能や微小環境におけるシグナル伝達に影響し得ます。SLC12A7 の発現異常は、疾患関連の状況において運動性やリモデリングの表現型の変化と関連づけられており、イオン輸送依存的な細胞挙動の機序研究における利用を支持します。
KCC4 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slc12a7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
KCC4 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Slc12a7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlc12a7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KCC4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlc12a7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKCC4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlc12a7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKCC4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。