Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409301

概要

JPH3はジャンクトフィリン3（junctophilin-3）をコードしており、細胞膜と小胞体／筋小胞体をつなぎ留めることで接合膜複合体（junctional membrane complex）を安定化させる膜架橋タンパク質です。ニューロンでは、ジャンクトフィリン3は局所的なCa²⁺マイクロドメインを支え、Ca²⁺シグナル伝達、膜興奮性、シナプス機能に影響する接触構造を組織化することにより、興奮収縮連関／興奮分泌連関を補助します。これらの過程は、細胞内カルシウム恒常性、小胞体（ER）シグナル、活動依存的応答を制御する経路と交差しています。JPH3の破綻や発現異常は、ハンチントン病様2（Huntington disease-like 2）を含む神経変性様の表現型と関連づけられており、カルシウム依存的な脆弱性や神経細胞機能不全の研究において重要です。

Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるJPH3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、JPH3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、JPH3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Junctophilin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Junctophilin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、JPH3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Junctophilin-3の機能に不可欠なJPH3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、JPH3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびJunctophilin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、JPH3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Junctophilin-3 HDRプラスミド（h）および Junctophilin-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはJPH3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のJPH3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。