JMJD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401883-KO-2

概要

KDM6Bは、ヒストン脱メチル化酵素JMJD3をコードしている。JMJD3はFe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼであり、転写抑制的なH3K27me3マークを除去することで転写活性化を促進する。JMJD3はエピジェネティックなリモデリングを介して、発生関連遺伝子プログラム、細胞運命転換、細胞老化、さらにNF-κBやTGF-β/SMADなどの経路下流における刺激応答性転写に影響を及ぼす。その活性は系譜特異的エンハンサーおよびプロモーターにおけるクロマチンのアクセス性を形成し、複数の細胞種にわたる炎症や分化の制御に寄与する。KDM6B/JMJD3機能の破綻は、がんのエピジェネティクス、免疫介在性疾患の病態生物学、その他、異常なクロマチン状態が遺伝子発現ネットワークを変化させる状況に関与することが示唆されている。

JMJD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるKDM6B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KDM6B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KDM6Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、JMJD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、JMJD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KDM6B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• JMJD3の機能に不可欠なKDM6Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KDM6Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• JMJD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびJMJD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KDM6B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  JMJD3 HDRプラスミド（h）および JMJD3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKDM6Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKDM6B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。