Plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD3 (h2): sc-401883-KO-2

Présentation

KDM6B code pour la déméthylase d’histones JMJD3, une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate, qui élimine les marques répressives H3K27me3 afin de favoriser l’activation transcriptionnelle. Par le remodelage épigénétique, JMJD3 influence les programmes géniques du développement, les transitions de destinée cellulaire, la sénescence et la transcription induite par des stimuli en aval de voies telles que NF‑κB et TGF‑β/SMAD. Son activité module l’accessibilité de la chromatine au niveau d’enhancers et de promoteurs spécifiques de lignage, contribuant ainsi à la régulation de l’inflammation et de la différenciation dans de nombreux types cellulaires. Une dérégulation de la fonction de KDM6B/JMJD3 a été impliquée dans l’épigénétique des cancers, la biologie des maladies à médiation immunitaire et d’autres contextes où des états de chromatine aberrants modifient les réseaux d’expression génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD3 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KDM6B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KDM6B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KDM6B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine JMJD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KDM6B pour l'étude de la signalisation de JMJD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KDM6B essentiels à la fonction de JMJD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KDM6B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le JMJD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le JMJD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KDM6B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le JMJD3 plasmide HDR (h) et le JMJD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KDM6B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KDM6B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.