JAK3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400835-ACT

JAK3（Janus kinase 3）は、共通γ鎖（IL2RG）と会合する受容体非依存性チロシンキナーゼであり、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-21を含む複数のインターロイキン受容体からのシグナルを伝達します。サイトカイン刺激により、JAK3は下流のSTATタンパク質を活性化し、リンパ球の発生・活性化・生存を制御する転写プログラムを統合的に調整することで、JAK–STATシグナル伝達を免疫恒常性に結び付けています。JAK3の活性または発現が異常になるとサイトカインシグナル伝達ネットワークが乱れ、原発性免疫不全の表現型に加え、血液悪性腫瘍でみられる異常シグナル伝達にも関与するとされています。JAK3の機能は免疫細胞の運命決定と密接に結び付いているため、T細胞およびNK細胞の生物学や炎症性シグナル伝達を制御する経路において広く研究されています。

JAK3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JAK3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JAK3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JAK3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJAK3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JAK3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJAK3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJAK3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJAK3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJAK3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。