JAK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421199-ACT

O Jak1 de camundongo codifica a Janus quinase 1 (JAK1), uma tirosina quinase não receptora que conecta receptores de citocinas a fatores de transcrição STAT a jusante, coordenando a sinalização imune inata e adaptativa. A JAK1 é central nas vias de interferons, da família de IL-6 e das citocinas da cadeia γ comum, moldando respostas antivirais, programas gênicos inflamatórios e o desenvolvimento de linfócitos. Além da via JAK–STAT, a sinalização dirigida por JAK1 interage com as redes MAPK e PI3K/AKT, influenciando proliferação, sobrevivência e diferenciação. A atividade ou expressão desregulada de JAK1 é frequentemente estudada na patobiologia inflamatória e em mecanismos de doenças associadas ao sistema imune, bem como em contextos de sinalização oncogênica nos quais sinais de citocinas remodelam as interações entre tumor e sistema imune.

JAK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Jak1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Jak1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Jak1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Jak1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAK1 em células tumorais com expressão de Jak1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.