Plasmide CRISPR d'Activation (m) JAK1: sc-421199-ACT

Le gène murin Jak1 code la kinase Janus 1 (JAK1), une tyrosine kinase non réceptrice qui couple les récepteurs des cytokines aux facteurs de transcription STAT en aval afin de coordonner la signalisation immunitaire innée et adaptative. JAK1 est au cœur des voies de l’interféron, de la famille de l’IL-6 et des cytokines utilisant la chaîne γ commune, modulant les réponses antivirales, les programmes géniques inflammatoires et le développement des lymphocytes. En plus de la voie JAK–STAT, la signalisation pilotée par JAK1 recoupe les réseaux MAPK et PI3K/AKT, influençant la prolifération, la survie et la différenciation. Une activité ou une expression dérégulée de JAK1 est fréquemment étudiée en physiopathologie inflammatoire et dans les mécanismes des maladies associées à l’immunité, ainsi que dans des contextes de signalisation oncogénique où les signaux cytokiniques remodèlent les interactions tumeur–système immunitaire.

JAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Jak1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Jak1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Jak1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JAK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Jak1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JAK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JAK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Jak1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.