IRS-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400474

概要

インスリン受容体基質2（IRS-2）は細胞質のアダプタータンパク質であり、活性化されたインスリン受容体およびIGF-1受容体を、PI3K–AKT経路やRAS–MAPK経路を介した下流シグナル伝達へと連結する。受容体媒介性のチロシンリン酸化を受けることで、IRS2はSH2ドメインをもつエフェクター分子をリクルートし、糖代謝、脂質恒常性、細胞増殖、生存、分化の制御に関与する。IRS2依存的シグナルは、肝臓でのインスリン作用、膵β細胞機能、エネルギーバランスに寄与し、その破綻はインスリン抵抗性、2型糖尿病、肥満、および関連する代謝表現型の研究でしばしば取り上げられる。IRS2シグナルの変化は、状況依存的に増殖や運動性へ影響することも示唆されており、経路解析や疾患メカニズム研究における標的としての有用性を支持している。

IRS-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIRS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IRS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IRS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRS-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRS-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IRS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRS-2の機能に不可欠なIRS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IRS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRS-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIRS-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IRS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRS-2 HDRプラスミド（h）および IRS-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIRS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIRS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。