IRP-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401817-NIC

O ACO1 humano codifica a proteína reguladora de ferro 1 (IRP-1), uma proteína citosólica bifuncional que alterna entre uma enzima aconitase contendo um cluster [4Fe–4S] e um regulador do metabolismo do ferro com capacidade de ligação a RNA. Em condições de limitação de ferro ou de estresse oxidativo, a IRP-1 liga-se a elementos responsivos ao ferro (IREs) em mRNAs-alvo para controlar a tradução e a estabilidade de genes-chave do manejo de ferro, como ferritina, receptor de transferrina e ferroportina, conectando a biogênese de clusters ferro–enxofre à regulação gênica pós-transcricional. Essa alternância integra-se à homeostase redox celular, ao metabolismo mitocondrial e a programas adaptativos à hipóxia ao ajustar a disponibilidade de ferro para a síntese de heme e para enzimas Fe–S. A sinalização IRP-1/IRE desregulada é estudada em contextos de anemia e sobrecarga de ferro, neurodegeneração, remodelação metabólica em células cancerosas e estresse inflamatório, nos quais o manejo de ferro influencia o dano oxidativo e a capacidade proliferativa.

IRP-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACO1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACO1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACO1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACO1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.