Plasmide Double Nickase (m) IRF3: sc-424792-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IRF3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IRF3 Double Nickase (m) et le plasmide IRF3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Irf3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IRF3 Antibody (D-3): sc-376455
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) IRF3 | sc-424792-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Irf3** code le facteur régulateur de l’interféron 3 (IRF3), un facteur de transcription central de l’immunité antivirale innée, qui couple la détection cytosolique des acides nucléiques à l’expression des interférons de type I et des gènes stimulés par l’interféron. Après activation en aval de voies de PRR, notamment cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS et TLR3–TRIF, IRF3 est phosphorylé par TBK1/IKKε, dimérise et se transloque dans le noyau pour coordonner des programmes transcriptionnels inflammatoires et antiviraux. La signalisation d’IRF3 interagit avec NF-κB et IRF7 pour moduler la production de cytokines, l’apoptose et le remodelage immunométabolique au cours de l’infection et de l’inflammation stérile. Une activité d’IRF3 dérégulée a été impliquée dans la susceptibilité aux infections virales, des réponses interféron aberrantes et des pathologies inflammatoires, faisant d’**Irf3** un nœud clé pour les études mécanistiques de la signalisation de l’immunité innée.
IRF3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Irf3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Irf3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Irf3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Irf3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.