IRF-1CRISPR激活质粒(h): sc-400551-ACT

人类 IRF1 基因编码干扰素调节因子 1（IRF-1），这是一种可与 DNA 结合的转录因子，能够整合干扰素与炎症信号，从而调控抗病毒防御、抗原呈递以及细胞命运决定。IRF-1 位于 JAK/STAT 信号通路下游，并与 NF-κB 及 IRF 家族成员协同作用，调节干扰素刺激基因、细胞因子通路以及 MHC I 类加工相关组分的转录。由于其在免疫监视、细胞凋亡与生长控制程序中的调节作用，IRF1 活性常用于感染生物学、肿瘤—免疫相互作用及慢性炎症状态等研究情境。IRF-1 信号失衡与先天性与适应性免疫反应改变，以及细胞对压力与细胞因子刺激敏感性的变化有关。

IRF-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性IRF1的表达。

IRF-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的IRF1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于IRF1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性IRF-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的IRF1位点，并能够研究内源性位点上依赖于IRF-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在IRF1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟IRF-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。