Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRAK-M Double Nickaseプラスミド (h): sc-403219-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IRAK-M Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IRAK-Mダブルニカースプラスミド（h）およびIRAK-Mダブルニカースプラスミド（h2）は、IRAK3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IRAK-M 抗体 (XX-6): sc-100389
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IRAK-M Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403219-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRAK-M Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403219-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトIRAK3はIRAK-Mをコードしており、IRAK-Mは自然免疫細胞におけるToll様受容体（TLR）およびIL-1受容体シグナル伝達の負の制御因子として機能する、キナーゼ様のアダプター分子である。IRAK-MはMyD88依存性シグナル伝達を抑制することで、下流のNF-κBおよびMAPKの活性化を制限し、サイトカイン産生、エンドトキシン耐性、炎症応答の収束（終息）に影響を与える。IRAK-Mの活性はマクロファージの極性化や抗菌プログラムの制御とも関連しており、組織炎症や免疫恒常性に影響するシグナルを統合する。IRAK3/IRAK-Mの発現異常は、敗血症、慢性感染、自己免疫性炎症、腫瘍関連骨髄系細胞による免疫抑制などの状況において、炎症シグナル伝達の変調と関連づけられている。
IRAK-M ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IRAK3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IRAK3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IRAK3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IRAK3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。