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IP3R-II双切口酶质粒(h) | sc-401067-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3R-II双切口酶质粒(h2) | sc-401067-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITPR2 编码肌醇 1,4,5-三磷酸受体 2 型(IP3R-II),这是一种位于内质网上的 Ca²⁺ 释放通道,可将磷脂酶 C 产生的 IP₃ 信号转化为胞质内的钙瞬变。IP3R-II 介导的 Ca²⁺ 通量通过 CaMK、钙调神经磷酸酶/ NFAT 以及线粒体 Ca²⁺ 串扰等通路,调控兴奋–分泌偶联、上皮与内皮信号传导以及转录程序。借助空间上受限的 Ca²⁺ 波动,IP3R-II 还会影响细胞代谢、对凋亡的易感性,以及特化组织中的屏障或转运功能。ITPR2 活性或表达的改变与分泌性上皮及相关生理过程所涉及疾病中的 Ca²⁺ 稳态失衡有关,因此可用于钙信号网络的机制研究。
IP3R-II 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ITPR2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ITPR2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ITPR2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ITPR2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。