INTS3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408952-ACT

インテグレーター複合体サブユニット3（INTS3）は、インテグレーター複合体の中核構成要素であり、RNAポリメラーゼIIによる転写と小核RNA（snRNA）の3′末端プロセシングを連結するとともに、より広範な転写産物の制御に関与する多タンパク質複合体の一部です。INTS3はまた、DNA損傷の検知および修復に関連する相互作用を介してゲノム維持プログラムにも関与し、複製ストレス応答や染色体の完全性の保持を支えます。RNAプロセシングと転写恒常性を整えることで、INTS3は細胞周期の進行やストレス適応的な遺伝子発現ネットワークに影響を及ぼします。インテグレーター関連経路の異常やDNA修復協調の破綻は、増殖制御の変化やゲノム不安定性といった表現型に関与するとされ、がん生物学や核内RNA代謝の異常を伴うその他の疾患との関連が示唆されています。

INTS3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性INTS3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

INTS3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における INTS3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はINTS3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性INTS3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のINTS3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるINTS3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびINTS3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるINTS3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。