Plasmide CRISPR d'Activation (m) Integrin αX/ITGAX/CD11c: sc-421170-ACT

Itgax code l’intégrine αX (CD11c), qui s’hétérodimérise avec ITGB2 pour former l’intégrine leucocytaire αXβ2 (CR4), médiant l’adhésion à des surfaces opsonisées par iC3b et contribuant à la phagocytose dépendante du complément. CD11c est fortement exprimée sur les cellules dendritiques, des sous-populations de macrophages et d’autres populations myéloïdes, reliant les signaux issus de la matrice extracellulaire et du complément au remodelage du cytosquelette, à la migration et à la formation de la synapse immunologique. Via la signalisation « outside-in » des intégrines, ITGAX influence des voies impliquant les kinases de la famille Src, Syk, PI3K et de petites GTPases, qui régulent la capture de l’antigène, son trafic intracellulaire et des programmes de gènes inflammatoires. Une activation myéloïde et une présentation antigénique dérégulées associées à ITGAX ont été impliquées, dans des modèles murins, dans l’inflammation auto-immune, la biologie des infections chroniques et le remodelage du microenvironnement tumoral-immunitaire.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Itgax sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Itgax dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Itgax, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αX/ITGAX/CD11c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Itgax natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αX/ITGAX/CD11c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αX/ITGAX/CD11c dans les cellules tumorales présentant une expression de Itgax silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.